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　　摘要目的:探讨不同的冷冻方法对卵子复苏和发育潜能的影响,以寻或胞浆内单精子注射到的未受精卵分为两组,橄コ谝磺鹣赴罢骋和爬涠常琁组带冠一丘细胞冷冻。按照冷冻保护剂中蔗糖浓度的不同分为的温度分为、组脖和、组植冰6愿.%,两者相比有显著性差异.2求适合不同时期卵子冷冻的方案,为成功地建立人类卵子库奠定实验基础。方法:标本来自年乱月在本中心进行体外受精一胚胎移植治疗的不孕症患者,均签署知情同意书。将从狤疘颊叩.蔗糖虰组.蔗糖俑堇涠呈敝脖苏后不同成熟期的卵子进行体外受精、胚胎培养,比较存活率、受精率等各项指标,观察发育潜能。结果:共冷冻复苏雎炎樱龃婊睿婊盥饰ァ组コ谝磺鹣赴涠与组谝磺鹣赴涠的存活率分别是.%年用不同浓度的蔗糖作为冷冻保护剂,与的存活率分别为.%和.%,两者相比有显著性差异.其中楹虰组中成熟诼炎拥拇婊盥史直鹗ッ〩两者相比有显著性差异.闯墒霱诤虶诼炎拥拇狤.%,

　　活率均无显著性差异。冷冻时采用不同植冰温度,榉諥一孕症患者的新鲜卵子行体外受精后,正常受精率为.%,两者恼崽墙.的蔗糖有利于成熟卵子的冷冻。.的蔗糖人类卵子,冷冻,体外受精,体外成熟℃階。,存活率分别为.%和.%,两者相比无显著性差异.籅组分组。与组活率分别为.%和.%,两者相比有显著性差异.@冻复苏后卵子行体外受精后,正常受精率为.%。而同期不相比有显著差异性.允纠涠掣此蘸舐炎诱J芫拭飨降低。结论:コ谝磺鹣赴涠撤n?商岣呗炎永涠澈蟮拇婊盥省中,一嬷脖弦。脖屎下炎拥睦涠场冷冻可以引起卵子正常受精率的降低。关键词:

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　　缩略词表逋馐芫慌咛ヒ浦诘ゾ幼⑸逋獬墒炫嘌⑴萜屏跏谝淮畏至阎衅谆琼死嗍渎压芤遗吲嘌促性腺激素释放激素死嗑诖傩韵偌に俾寻碳に辅助生育技术姿嵫位撼逡⑴跏诙畏至阎衅,槐G宕闷橹嘌撼迦死嗍渎压芤蚜雅嘌ㄖ趸巳廾ご傩韵偌に一疭工—す

　　作者签名:——导师签名——日期:——年一月一日日期:——年一月一日原创性声明关于学位论文使用授权说明本人声明,所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了论文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我论文的全部或部分内容,可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在在论文中作了明确的说作者签名:本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留学位论文,允许学位论文被查阅和借阅;学校可以公布学位文;学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。明。

　　年获得人类冷冻卵子的首例妊娠。近年来,冷冻生物学在人类生殖医学领治疗,并获得了良好的结果。在很多行模涠撑咛サ淖糯猜始航咏靶孪省迸胎,对提高艿某晒β首龀隽酥匾9毕住H死嗑涌饧菏敌辛斯娣痘芾怼H欢人类卵子的冷冻仍未获得理想的实验效果,尽管对于卵子的冷冻已有健康婴儿出生的冷冻带来的宗教、伦理、法律和临床上的一系列棘手问题。三:衰、盆腔疾病、外科手术、放疗或化疗可能引起生育力丧失的妇女,卵子冷冻或卵巢皮质块的冷冻是保存生育力的唯一方法。四:对于因为种种原因目前不愿生育的妇女,卵子冷冻也是保存生育力的良好方法之一。五:对女方是遗传病患者或遗传病基因携前卵子冷冻仍处于研究阶段,冷冻后的存活率、受精率、卵裂率都还不尽人意,但随着冷冻生物学、遗传学、分子生物学、细胞生物学、生物生理学等的进一步发展,卵子冷冻技术必将逐步成熟,为人类生殖事业做出更大的贡献。本研究的目的是探讨不同的冷冻方法对卵子复苏和发育潜能的影响,以寻求适合不同时期卵子冷冻的方案,为成功地建立人类卵子库奠定实验基础。早在年,意大利学者就用雪冷冻动物精子,年获得了活动的人类冻融精子,第一个用冻储精液做人工授精获得正常分娩的婴儿在年由ǖ馈域得到了迅速的应用和发展。目前,人类胚胎冷冻已经广泛应用于不孕症患者的常规报道陀蛭B炎拥纳镅卣鞯贾吕涠澈蟾此战蠭的成功率极低,尚不可作为一项常规的不孕症治疗措施应用于临床。近年来,卵子的冷冻保存一直是生殖医学界及生物界研究的热点,卵子冷冻较胚胎冷冻具有更多的优势。一:可以减少不孕症治疗上的花费。二:可以解决因胚胎对于因为卵巢早带者,通过提供健康女性的卵子进行生育,可以促进优生,提高民族的素质。虽然目舌硕士学位论文月目百

　　第一章实验仪器与材料㈨㈤㈣㈣㈣㈣㈤?㈣㈤㈣㈤标本来源:主要仪器:本研究收集年月在本中心接受常规体外受精一胚胎移植卵子,均签署知情同意书。接受疘撸捎贸9娴拇傩韵偌に乜刂菩猿行降调节,抑制自身的峰,一直用到注射眨谠戮牡天或第炜J给予促性腺激素和刺激卵泡生长;短方案是在月经的第欤备重庆市计划生育科学研究所附属医院人类精子库提供。苏净集团各种细胞培养器皿:美国公司体视镜唇馄示:程序冷冻仪:英国公司生产.显微操作系统:普通显微镜:离心机:德国旧保温台:德国公司桌面微型培养箱:丹麦鶪防震台:丹麦鶤狤患者未受精的卵子及行胞浆内单精子显微注射琁患者发育未成熟的排卵方案,根据患者的年龄、内分泌状况等条件分别给予长方案或短方案。长方案是在刺激周期的月经来潮前欤璐傩韵偌に厥头偶に丶ざ—对垂体进和促性腺激素,一直到注射眨玫氖荊源固宓南却碳ず秃笠制作用原理。取卵是在注射小时进行。复苏后显微授精用的正常精子由超净工作台:——站患层流工作问:奥雅荽┐滔低掣貉刮鳎篖培养箱:倒置显微镜:液氮罐:丹麦旧鶰冰箱:海尔公司生产篈德国旧鶷硕士学位论文/穕实验仪器与材料,一

　　堡主兰垡笙壅壅墼堡墨兰塑整主要试剂及其配制:冷冻液:复苏液:恒温试管架:英国旧鶴精子分析仪:清华同方配制冷冻保护液和复苏液所需试剂:血清蛋白代用品,疭,蔗糖,配制:配制:腥芙,蔗糖,再加配制:腥芙.蔗糖,再加配制:腥芙.的蔗糖和恼崽配制:河.液:鲜鲆禾寰.鞴顺赣茫。4妫4媸奔恒温水浴箱:英国旧鶶显微穿刺针:取卵针:,第三代换撼宓腍培养基琎’珹一槐,液:含有%腗配制:加入加入崽堑腟海.的和崽中加入液:腜.蔗糖液:恼崽液:甇液混匀配制:液与液:腜一狾一

　　里堕:鉴一塞壁垡鲞兰翌整人成熟泡液:㈣’珹一卵裂培养基琎’珹~囊胚培养基琎配制处理精液所需试剂低浓度梯度离心培养基’珹一高浓度梯度离心培养基’珹一精子冲洗培养基’珹一配制消化氧一丘细胞所需试剂透明质酸酶,配制取卵、体外成熟、体外受精、体外培养所需试剂第三代嘌琎’珹一培养用油配制:取卵时,回收第一或第二管清亮的卵泡液约,/离心分钟,取上清用除菌器过滤除菌分装备用,一℃保存。配制:用含%腗涑芍张ǘ任/透明质酸酶液。疭,,疭,痵,’珹珹一

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